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外周血中PBMC 分离方法

英文全称：Peripheral blood mononuclear cell

外周血单个核细胞，指外周血中具有单个核的细胞。

包含淋巴细胞、单核细胞（monocyte）、树突状细胞和其它少量细胞（造血干细胞等）。

外周血各种血细胞的密度不尽相同，利用淋巴细胞分层液（Ficoll）作密度梯度离心，使一定比重的细胞群按相应密度梯度分布，从而将各种血细胞加以分离。

1.采血，稀释（外周血：稀释液 PBS/RPMI-1640=1：2）；

2.在离心管中加入 Ficoll，沿倾斜的管壁缓缓加入稀释的外周血（Ficoll：稀释血=1：
2）；

3.20℃，1500r/min，离心 30min；

4.轻轻吸取 PBMC 层移入另一试管中；

5.加足量稀释液充分洗涤，1800 r/min 离心 10min ，弃上清。
6.加足量稀释液充分洗涤，1800 r/min 离心 5min ，弃上清。
7.加冻存液（约 1.5ml），分装至 3 小瓶，每瓶约 0.5ml，-80 保存。

1 每毫升外周血液大约可获 1×106 单个核细胞；

2 Ficoll 应适量，外周血应充分稀释，温度直接影响到 Ficoll 的比重和分离效果；

3 在 Ficoll 上加入稀释外周血时，应缓慢加，以免冲散界面；

4 吸取单个核细胞层时，应避免吸出过多的上清液或分层液而导致血小板污染。